大肠癌组织p53、PCNA表达与临床病理及预后的关系
作者：潘志忠 万德森 张昌卿 冯海涛 邵建永 詹友庆 周志伟 陈映波 石明 陈功
单位：潘志忠 万德森 詹友庆 周志伟 陈映波 石明 陈功，中山医科大学肿瘤防治中心腹科(广州，510060)；张昌卿 冯海涛，中山医科大学肿瘤防治中心中心实验室；邵建永，中山医科大学肿瘤防治中心病理科
关键词：结直肠肿瘤；p53；增殖细胞核抗原；免疫组化
癌症990529 【摘 要】 目的：探讨突变型p53蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)在结直肠癌细胞中的表达情况与临床病理及预后的关系。方法：用LSAB免疫组化方法检测172例癌组织中的p53蛋白、PCNA的表达情况，用Logistic回归分析p53表达的相关因素，Cox模型分析p53、PCNA表达对预后的的影响。结果：p53、PCNA阳性率分别为436%(75/172)、913%(157/172)。p53表达与临床病理因素无关，p53阳性预后比阴性差，p53阳性常伴有PCNA过度表达，但PCNA高表达，预后有好的趋势。结论：结直肠癌p53突变的癌细胞多呈高增殖状态，p53阳性、PCNA中、低强度表达是预后差的生物学指标。PCNA高表达，是癌细胞处于高增殖状态、对化疗敏感的标志，对该类病人给予辅助化疗可望提高根治术疗效。
, http://www.100md.com
中图分类号：R735.34 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)05-0586-02
Expression of p53,PCNA in colorectal cancer and its clinopathological correlation and prognostic significance
PAN Zhi-zhong,WAN De-sen,et al.
Department of Abdominal Surgery of Cancer Center of Sun Yat-sen University of Medical Siences,Guangzhou 510060,P.R. China
ZHANG Chang-qing,et al.
, 百拇医药
Laboratry Center of Cancer Hospital of Sun Yat-sen University of Medical Seiences
【Abstract】 Objective：To explore the expression of mutant p53 protein,PCNA in colorectal cancer and its clinopthological correlation and prognostic significance. Methods：p53 protein and PCNA were immunohistochemically studied by LSAB in formalin-fixed prarffin embeded specimens of 172 colorctal cancers. Logistic and Cox model were used to analyse the relationship between p53 and PCAN,clinopathological manifestations. Results：p53 and PCNA positive-rate were 43.6% (75/172) and 91.3% (157/172),respectively. There was no significant correlation between p53 expression and clinopathological manifestations. p53 positive tumors always coexisted with over expression of PCNA,and its prognosis was worse than tnat of p53 negative tumor. Although no statistic significance of prognosis was found in over-expressin of PCNA,strong PCNA would have tendency to better prognosis. Conclusions：p53 positive-cells were associated with high growth. Immunoreactivity of p53 with weak PCNA in colorectal cancer would be biologic markers of worse prognosis but strong PCNA would be a biologic marker of cancer cell in high growth status,which susceptible to 5-FU,and adjuvant chemotherapy for the patients would improve the result of radical resection.
, 百拇医药
Key words：colorectal neoplasms;p53;PCNA;immunohistochemistry
p53基因是抑癌基因，当其发生突变和杂合性丢失而至失活时，常引起肿瘤的发生及发展。增殖细胞核抗原(PCNA)是细胞处于增殖周期的一个客观生物学指标。本研究用免疫组化方法检测突变型p53、PCNA在结直肠癌细胞中的表达情况，以探讨二者的过度表达与结直肠癌的临床病理及预后的关系。
1 材料和方法
1.2 临床资料
收集我院1986年7月至1989年11月间根治性切除的结直肠癌172例，全部病例均获病理诊断。其中结肠癌66例，直肠癌106例；男100例，女72例；年龄21～76岁，中位年龄为54岁；腺癌146例，粘液腺癌22例，未分化癌4例；Dukes'A期53例，B期80例，C期39例。
, 百拇医药
1.2 免疫组化检测p53、PCNA
收集上述病例手术切除标本蜡块，5μm切片，用LSAB免疫组化方法检测癌组织中的p53蛋白、增殖细胞核抗原(PCAN)的表达情况。抗p53抗体(DO-7)和PCNA抗体(PC10)购自丹麦Dako公司产品。表达强度分四级，多个高倍视野(×400)计数500个肿瘤细胞，无阳性细胞为阴性，阳性细胞数<30%(+)，阳性细胞数30%～69%为(++)，阳性细胞数≥70%为(+++)。
1.3 统计方法
在计算机上用美国SPSS6.0软件包的Logistic回归模型，以前向逐步(似然比)法筛选与p53表达有关的临床病理诸因素，p53、PCNA不同表达状态的分组生存曲线用Cox模型分析、比较。
临床病理因素分别按括号内标准分层：性别(男、女)，年龄(≤30岁、31～60岁、>60岁)，肿瘤部位(结肠、直肠)，大体分型(隆起型、溃疡型、浸润型)，组织学分型(腺癌、粘液腺癌、未分化癌)，病理分级(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)，浸润肠壁深度(粘膜、浅肌层、深肌层、浆膜层)，Dukes'分期(A、B、C)，PCNA表达(阴性、“+～++”、“+++”)，p53表达(-、+)。
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末次随访时间为截尾时间，随访28～4106天(中位时间2625天)。先后因发生局部复发和/或远处转移而死亡50例，68%的病例死于术后3年内。36例发生远处转移，常见的转移部位为肺(14例)和肝(11例)，占69.4%(25/36)。1例术后28天死于心脏病，手术死亡率0.6%。
2 结果
2.1 p53、PCNA表达情况
p53阳性率43.6%(75/172)，PCNA阳性率91.3%(157/172)。结果详见表1。
表1 172例结直肠癌p53、PCNA表达情况 p53表达
例数
PCNA表达
-
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+～++
+++
例
%
例
%
例
%
-
97
12
7.0
65
37.8
, 百拇医药
20
11.6
+
75
3
1.8
48
27.9
24
13.9
合计
172
15
, http://www.100md.com 8.7
113
65.7
44
25.6
2.2 p53表达的多因素Logistic回归分析
用多因素Logistic回归分析，仅PCNA进入回归方程(P=0.0240)，说明与p53表达有密切关系的因素仅为PCNA表达强度。其回归系数(β=0.6461)大于0，说明PCNA高表达的结直肠癌其p53表达也呈增高的趋势。而基它临床病理因素则与p53表达无关(P<0.05)。
2.3 p53、PCNA的单因素Cox回归分析
结果显示，p53阳性病例预后较阴性差(P<0.05)，PCNA表达对预后的影响无统计学意义(P<0.05)，但其回归系数小于0，说明PCNA高表达者对治疗敏感，预后较好，见表2、图1。表2 p53、PCNA的单因素Cox回归分析结果 因素
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回归系数
标准误
wald值
P值
p53
0.5711
0.2866
3.9707
0.0463
PCNA
-0.4069
0.2367
2.9546
, 百拇医药
0.0856
图1 PCNA分组生存曲线
3 讨论
研究表明，p53基因有“分子警察”作用。当细胞DNA受损时，p53基因表达，并通过反式作用激活一系列细胞周期调节基因(如p21基因)，使细胞停留在G1期，修复DNA。如p53突变或杂合性丢失而失活，则这种p53依赖性细胞周期负调控作用丧失，细胞染色体发生畸变，并逐步转化为癌细胞，且处于高增殖状态〔1，2〕。许多研究证明，用免疫组化方法检测p53、PCNA，可反映癌细胞的p53突变情况及细胞增殖状态，二者与肿瘤的恶性度和预后有关(2，3)。
本研究结果显示，p53阳性率为436%，p53过度积聚的结直肠癌细胞，细胞增殖活性呈逐步升高的趋势(见表1)，Logistic回归多因素分析提示p53表达与PCNA强度呈正相关，提示p53突变的癌细胞常呈高增殖状态。Cox模型分析显示，本组p53阳性者预后比阴性者差(见表2，P<0.05)，是预后差的一个生物学指标。
, 百拇医药
罗京伟等报道〔4〕，PCNA的表达与鼻咽癌的放射敏感性呈正相关，高PCNA表达者较低PCNA表达者的放射敏感性高，预后有好的趋势。本研究也发现，虽然PCNA表达强度对预后的影响无统计学意义，但分析PCAN的分组生存曲线(附图)，处于高增殖状态(PCNA+++)的结直肠癌却比处于中、低增殖状态(PCNA+～++)者预后要好。这种差异可能是由于高增殖状态癌细胞对化疗有较高的敏感性引起的。本组病例常规给予以5-FU为主的术中肠腔化疗或/和术后辅助化疗，手术残留的癌细胞如处于高增殖状态，对辅助化疗较敏感，提高了根治术的疗效，病人的预后较好。而中、低增殖状态的残留癌细胞对辅助化疗不敏感，癌细胞术后持续活跃增殖，肿瘤中速增长，故该组病人较易发生术后复发、转移，预后最差。根据本研究结果，我们认为，结直肠癌细胞PCNA高表达，是细胞高增殖状态的标志，但不能机械地认为预后就差。由于该类癌细胞对化疗敏感，如给予辅助化疗，就可降低这类PCNA高表达、p53阳性病人的危险性，提高根治术的疗效。本组64.0%(48/75)的p53阳性病例，癌细胞处于辅助化疗不敏感的中、低增殖状态。故预后较差，对该类病人须研究更为有效的辅助治疗方法。
, 百拇医药
本研究还显示，p53的表达与性别、年龄、病理类型、病理分级、浸润肠壁深度、病理分期无关，与国内外的相关研究结果一致〔3，5，6〕，说明p53是一个独立的预后指标。应进一步研究由p53突变所引起的细胞生物学改变，以揭示p53突变引起预后差的作用机制，为临床治疗提供一个有效的治疗靶点。
〔参考文献〕
〔1〕 郑杰，吴秉铨.p53研究的新进展〔J〕.中华病理杂志，1997，26(4)：251.
〔2〕 甘华田，欧阳欣，王一平，等.大肠癌p53蛋白表达与细胞增殖状态及预后的关系〔J〕.中华病理杂志，1996，18(4)：244.
〔3〕 Yamaguchi A,Kurosaka Y,Fushida S,et al. Expression of p53 protein in colorectal cancer and its relationship to short-term prognosis〔J〕.Cancer,1992,70:2778～ 2784.
, http://www.100md.com
〔4〕 罗京伟，徐国镇，杨伟志.增殖细胞核抗原的表达和鼻咽癌的临床相关性研究〔J〕.中华放射肿瘤学杂志，1997，6(3)：170.
〔5〕 钱桦，郁宝铭，周锡庚，等.人大肠肿瘤细胞p53基因突变、表达及临床意义〔J〕.中华肿瘤杂志，1995，17(5)：332.
〔6〕 Scott N,Sagar P,Stewart J,et al. p53 in colorectal cancer:clinicopathological correlation and prognostic significance〔J〕. Br J Cancer,1991,63:317～319.
收稿日期：1998-05-14修回日期：1999-01-06, 百拇医药
单位：潘志忠 万德森 詹友庆 周志伟 陈映波 石明 陈功，中山医科大学肿瘤防治中心腹科(广州，510060)；张昌卿 冯海涛，中山医科大学肿瘤防治中心中心实验室；邵建永，中山医科大学肿瘤防治中心病理科
关键词：结直肠肿瘤；p53；增殖细胞核抗原；免疫组化
癌症990529 【摘 要】 目的：探讨突变型p53蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)在结直肠癌细胞中的表达情况与临床病理及预后的关系。方法：用LSAB免疫组化方法检测172例癌组织中的p53蛋白、PCNA的表达情况，用Logistic回归分析p53表达的相关因素，Cox模型分析p53、PCNA表达对预后的的影响。结果：p53、PCNA阳性率分别为436%(75/172)、913%(157/172)。p53表达与临床病理因素无关，p53阳性预后比阴性差，p53阳性常伴有PCNA过度表达，但PCNA高表达，预后有好的趋势。结论：结直肠癌p53突变的癌细胞多呈高增殖状态，p53阳性、PCNA中、低强度表达是预后差的生物学指标。PCNA高表达，是癌细胞处于高增殖状态、对化疗敏感的标志，对该类病人给予辅助化疗可望提高根治术疗效。
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中图分类号：R735.34 文献标识码：A 文章编号：1000-467X(1999)05-0586-02
Expression of p53,PCNA in colorectal cancer and its clinopathological correlation and prognostic significance
PAN Zhi-zhong,WAN De-sen,et al.
Department of Abdominal Surgery of Cancer Center of Sun Yat-sen University of Medical Siences,Guangzhou 510060,P.R. China
ZHANG Chang-qing,et al.
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Laboratry Center of Cancer Hospital of Sun Yat-sen University of Medical Seiences
【Abstract】 Objective：To explore the expression of mutant p53 protein,PCNA in colorectal cancer and its clinopthological correlation and prognostic significance. Methods：p53 protein and PCNA were immunohistochemically studied by LSAB in formalin-fixed prarffin embeded specimens of 172 colorctal cancers. Logistic and Cox model were used to analyse the relationship between p53 and PCAN,clinopathological manifestations. Results：p53 and PCNA positive-rate were 43.6% (75/172) and 91.3% (157/172),respectively. There was no significant correlation between p53 expression and clinopathological manifestations. p53 positive tumors always coexisted with over expression of PCNA,and its prognosis was worse than tnat of p53 negative tumor. Although no statistic significance of prognosis was found in over-expressin of PCNA,strong PCNA would have tendency to better prognosis. Conclusions：p53 positive-cells were associated with high growth. Immunoreactivity of p53 with weak PCNA in colorectal cancer would be biologic markers of worse prognosis but strong PCNA would be a biologic marker of cancer cell in high growth status,which susceptible to 5-FU,and adjuvant chemotherapy for the patients would improve the result of radical resection.
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Key words：colorectal neoplasms;p53;PCNA;immunohistochemistry
p53基因是抑癌基因，当其发生突变和杂合性丢失而至失活时，常引起肿瘤的发生及发展。增殖细胞核抗原(PCNA)是细胞处于增殖周期的一个客观生物学指标。本研究用免疫组化方法检测突变型p53、PCNA在结直肠癌细胞中的表达情况，以探讨二者的过度表达与结直肠癌的临床病理及预后的关系。
1 材料和方法
1.2 临床资料
收集我院1986年7月至1989年11月间根治性切除的结直肠癌172例，全部病例均获病理诊断。其中结肠癌66例，直肠癌106例；男100例，女72例；年龄21～76岁，中位年龄为54岁；腺癌146例，粘液腺癌22例，未分化癌4例；Dukes'A期53例，B期80例，C期39例。
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1.2 免疫组化检测p53、PCNA
收集上述病例手术切除标本蜡块，5μm切片，用LSAB免疫组化方法检测癌组织中的p53蛋白、增殖细胞核抗原(PCAN)的表达情况。抗p53抗体(DO-7)和PCNA抗体(PC10)购自丹麦Dako公司产品。表达强度分四级，多个高倍视野(×400)计数500个肿瘤细胞，无阳性细胞为阴性，阳性细胞数<30%(+)，阳性细胞数30%～69%为(++)，阳性细胞数≥70%为(+++)。
1.3 统计方法
在计算机上用美国SPSS6.0软件包的Logistic回归模型，以前向逐步(似然比)法筛选与p53表达有关的临床病理诸因素，p53、PCNA不同表达状态的分组生存曲线用Cox模型分析、比较。
临床病理因素分别按括号内标准分层：性别(男、女)，年龄(≤30岁、31～60岁、>60岁)，肿瘤部位(结肠、直肠)，大体分型(隆起型、溃疡型、浸润型)，组织学分型(腺癌、粘液腺癌、未分化癌)，病理分级(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)，浸润肠壁深度(粘膜、浅肌层、深肌层、浆膜层)，Dukes'分期(A、B、C)，PCNA表达(阴性、“+～++”、“+++”)，p53表达(-、+)。
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末次随访时间为截尾时间，随访28～4106天(中位时间2625天)。先后因发生局部复发和/或远处转移而死亡50例，68%的病例死于术后3年内。36例发生远处转移，常见的转移部位为肺(14例)和肝(11例)，占69.4%(25/36)。1例术后28天死于心脏病，手术死亡率0.6%。
2 结果
2.1 p53、PCNA表达情况
p53阳性率43.6%(75/172)，PCNA阳性率91.3%(157/172)。结果详见表1。
表1 172例结直肠癌p53、PCNA表达情况 p53表达
例数
PCNA表达
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13.9
合计
172
15
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113
65.7
44
25.6
2.2 p53表达的多因素Logistic回归分析
用多因素Logistic回归分析，仅PCNA进入回归方程(P=0.0240)，说明与p53表达有密切关系的因素仅为PCNA表达强度。其回归系数(β=0.6461)大于0，说明PCNA高表达的结直肠癌其p53表达也呈增高的趋势。而基它临床病理因素则与p53表达无关(P<0.05)。
2.3 p53、PCNA的单因素Cox回归分析
结果显示，p53阳性病例预后较阴性差(P<0.05)，PCNA表达对预后的影响无统计学意义(P<0.05)，但其回归系数小于0，说明PCNA高表达者对治疗敏感，预后较好，见表2、图1。表2 p53、PCNA的单因素Cox回归分析结果 因素
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回归系数
标准误
wald值
P值
p53
0.5711
0.2866
3.9707
0.0463
PCNA
-0.4069
0.2367
2.9546
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0.0856
图1 PCNA分组生存曲线
3 讨论
研究表明，p53基因有“分子警察”作用。当细胞DNA受损时，p53基因表达，并通过反式作用激活一系列细胞周期调节基因(如p21基因)，使细胞停留在G1期，修复DNA。如p53突变或杂合性丢失而失活，则这种p53依赖性细胞周期负调控作用丧失，细胞染色体发生畸变，并逐步转化为癌细胞，且处于高增殖状态〔1，2〕。许多研究证明，用免疫组化方法检测p53、PCNA，可反映癌细胞的p53突变情况及细胞增殖状态，二者与肿瘤的恶性度和预后有关(2，3)。
本研究结果显示，p53阳性率为436%，p53过度积聚的结直肠癌细胞，细胞增殖活性呈逐步升高的趋势(见表1)，Logistic回归多因素分析提示p53表达与PCNA强度呈正相关，提示p53突变的癌细胞常呈高增殖状态。Cox模型分析显示，本组p53阳性者预后比阴性者差(见表2，P<0.05)，是预后差的一个生物学指标。
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罗京伟等报道〔4〕，PCNA的表达与鼻咽癌的放射敏感性呈正相关，高PCNA表达者较低PCNA表达者的放射敏感性高，预后有好的趋势。本研究也发现，虽然PCNA表达强度对预后的影响无统计学意义，但分析PCAN的分组生存曲线(附图)，处于高增殖状态(PCNA+++)的结直肠癌却比处于中、低增殖状态(PCNA+～++)者预后要好。这种差异可能是由于高增殖状态癌细胞对化疗有较高的敏感性引起的。本组病例常规给予以5-FU为主的术中肠腔化疗或/和术后辅助化疗，手术残留的癌细胞如处于高增殖状态，对辅助化疗较敏感，提高了根治术的疗效，病人的预后较好。而中、低增殖状态的残留癌细胞对辅助化疗不敏感，癌细胞术后持续活跃增殖，肿瘤中速增长，故该组病人较易发生术后复发、转移，预后最差。根据本研究结果，我们认为，结直肠癌细胞PCNA高表达，是细胞高增殖状态的标志，但不能机械地认为预后就差。由于该类癌细胞对化疗敏感，如给予辅助化疗，就可降低这类PCNA高表达、p53阳性病人的危险性，提高根治术的疗效。本组64.0%(48/75)的p53阳性病例，癌细胞处于辅助化疗不敏感的中、低增殖状态。故预后较差，对该类病人须研究更为有效的辅助治疗方法。
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本研究还显示，p53的表达与性别、年龄、病理类型、病理分级、浸润肠壁深度、病理分期无关，与国内外的相关研究结果一致〔3，5，6〕，说明p53是一个独立的预后指标。应进一步研究由p53突变所引起的细胞生物学改变，以揭示p53突变引起预后差的作用机制，为临床治疗提供一个有效的治疗靶点。
〔参考文献〕
〔1〕 郑杰，吴秉铨.p53研究的新进展〔J〕.中华病理杂志，1997，26(4)：251.
〔2〕 甘华田，欧阳欣，王一平，等.大肠癌p53蛋白表达与细胞增殖状态及预后的关系〔J〕.中华病理杂志，1996，18(4)：244.
〔3〕 Yamaguchi A,Kurosaka Y,Fushida S,et al. Expression of p53 protein in colorectal cancer and its relationship to short-term prognosis〔J〕.Cancer,1992,70:2778～ 2784.
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〔4〕 罗京伟，徐国镇，杨伟志.增殖细胞核抗原的表达和鼻咽癌的临床相关性研究〔J〕.中华放射肿瘤学杂志，1997，6(3)：170.
〔5〕 钱桦，郁宝铭，周锡庚，等.人大肠肿瘤细胞p53基因突变、表达及临床意义〔J〕.中华肿瘤杂志，1995，17(5)：332.
〔6〕 Scott N,Sagar P,Stewart J,et al. p53 in colorectal cancer:clinicopathological correlation and prognostic significance〔J〕. Br J Cancer,1991,63:317～319.
收稿日期：1998-05-14修回日期：1999-01-06, 百拇医药