内皮素及NO在严重烧伤早期胃肠粘膜缺血中的作用
作者：崔晓林 盛志勇 郭振荣 贺立新 陆连荣
单位：100037 北京，解放军第三四医院全军烧伤研究所
关键词：烧伤；休克；内皮素；一氧化氮
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【摘要】目的：为深入探讨云锡矿工肺癌高发的发病机理，找寻早期诊断的方法和理论依据。方法：应用免疫组化方法对云锡矿工肺癌41例(M组)、非云锡地区非矿工人群肺癌25例(NM组)和正常肺组织15例(C组)进行p53检测比较研究。数据用四格表确切概率法进行组间显著性测验。结果：发现p53阳性率M组为60.98%，NM组为36%，C组为0，三组间差异有高度显著性(P<0.01)，M组与NM组亦有显著差异(P<0.05)，且M组与NM组间鳞癌的p53阳性存在显著差异(0.05
中图号：R734.2
A Study of the p53 Tumor Suppressor Gene in Yunnan
Tin Miner's Lung Carcinoma
Jin Kewei1 Gao Qian1 Sun Laihua2， et al
1 Department of Pathology, Kunming Medical College, Kunming 650031
2 Labour Health Institute of Yunnan Tin Industry company, Gejiu 661400
, 百拇医药
【Abstract】 Purpose: To search the pathogenesis of lung carcinoma in Yunnan Tin Mine and looking for early diagnosis method. Methods: The p53 protein were studied in 41 cases of Yunnan Tin miner's lung carcinoma (Group M), 25 cases of lung carcinoma in other regions (Group NM), and 15 cases of normal lung tissue (Group C), with immunohistochemistry method. Results: The result shows that positive rate of p53 was 60.98% in Group M, 36.00% in Group NM and 0.00% in Group C, respectively. There is a significant difference between Group M and Group NM (P<0.05). In addition, a significant difference is also identified in comparison of squamous cell carcinoma between these two groups. ( 0.05< P< 0.10). Conclusion: It suggests that p53 mutation is common in lung carcinoma, and the special carcinogenesis factors of Yuman Tin mine's dust may results in p53 mutation more frequently. It might be an explanation why the squamous cell carcinoma make up the majority of Yunnan Tin miner's lung carcinoma. An interesting finding is that positive of p53 in hyperplastic epithelial cells of bronchial mucosas and alveolar type Ⅱ around carcinoma of the lung. Whether it is an indicator of the early lung carcinoma? It is worth to study farther.
, http://www.100md.com
Key words: Lung carcinoma, Yunnan Tin miner, p53, Immunohistochemistry.
云南个旧市云锡矿工肺癌高发引起了国内外关注，经多方研究，其发病与矿粉中氡及其子体和砷、铅、铁、铝等多种元素的共同作用密切相关[1]。为深入探讨其发病机理，我们对矿工和非矿工肺癌p53基因的表达进行了检测并作比较分析。
1 材料和方法
1.1材料来源
收集云锡公司矿工肺癌标本41例，称矿工肺癌组(M组)，全为男性，年龄45～63岁，平均52.2岁，坑下工龄7～39年，平均24年。其中鳞癌27例，腺癌6例，鳞腺复合癌3例，小细胞未分化癌5例；非云锡地区非矿工人群肺癌25例，称非矿工肺癌组(NM组)，全为男性，年龄段与M组相同。其中鳞癌10例，腺癌14例，鳞腺复合癌1例；并取非肺部疾患为主要死因的尸解肺组织15例作对照组(C组)，全为男性，年龄段与M组相同。以上材料经福尔马林固定，石蜡包埋，常规制片备用，H.E染色进行病理组织学观察。
, 百拇医药
1.2方法
1.2.1免疫组化方法检测：p53单抗为美国SantaCruz公司生产，免疫组化试剂盒为美国ZYMED公司生产。具体操作步骤：常规脱蜡、水化；3%H2O2孵育20min，37℃；PBS洗5min，3次；枸橼酸盐缓冲液中加热10min，92℃～98℃；缓冲液与切片一齐置入室温下冷却10min；取出切片，PBS洗5min，3次；以下按LSAB法进行(即SP法)。
1.2.2结果判断：p53阳性为棕色，位于细胞核内，根据颜色深浅，分为弱阳性(+)、阳性(++)和强阳性(+++)(图1)，以PBS代替一抗为阴性对照，不显色。本文每例按上法重复3次，均获相同结果。
1.3统计方法
检测数据用四格表确切概率法进行组间显著性测验。
, 百拇医药
2 结果
2.1p53免疫组化结果
经统计学处理，χ2=17.29，P<0.01，三组间差异有高度显著性。M组与NM组比较，χ2=3.88，P<0.05，存在显著差异。而M组与C组间比较，χ2=16.52，P<0.0001；NM组与C组比较，χ2=6.97，P<0.01，均存在高度显著差异，详见表1。
表1 两组肺癌组织和对照组p53免疫组化检测结果
组别
例数
p53表达
阳性率(%)
, http://www.100md.com
P值
+
++
+++
矿工(M组)
41
16
2
7
25(60.98)
<0.05▲
非矿工(NM组)
25
, http://www.100md.com
6
2
1
9(36.0)
<0.0001*
对照(C组)
15
0
0
0
0(0.0)
<0.01▲*
▲：M与NM比较；*：M与C比较；▲*：NM与C比较
, http://www.100md.com
癌周肺组织内p53免疫组化检测发现矿工和非矿工组可见增生支气管粘膜上皮和Ⅱ型肺泡上皮呈现阳性(图2，3)。
2.2不同组织学类型肺癌p53表达
不同组织学类型肺癌p53免疫组化检测结果见表2。可见矿工肺鳞癌的p53表达明显高于非矿工肺鳞癌的p53表达。
表2 肺癌不同组织学类型p53检测结果
组织学类型*
矿工组
非矿工组
例数
阳性
%
, http://www.100md.com
例数
阳性
%
鳞癌
27
15
55.6
10
2
20
腺癌
6
5
83.33
, http://www.100md.com
14
7
50
*组织学分类除鳞癌、腺癌外，余因例数太少，故未列入表内。
由于矿工肺癌标本收集不易，本组所获病例有限，故此表组间阳性率比较时取α=0.10作为显著性水准，即P≤0.10认为差异有显著性[2]。表2经统计学处理，M组与NM组间鳞癌p53阳性0.05
3 讨论
已经认识到p53是重要的抑癌基因，与多种癌的发生有关，基因突变是常见的现象[3，4]，突变或与病毒蛋白结合的p53失活不能履行功能而导致恶性克隆的迅速选择[5]。野生型p53基因产物p53蛋白代谢不稳定，半衰期短，在正常细胞中用免疫组化法几乎不能检出p53蛋白。而突变型p53蛋白稳定性高、半衰期长，在肿瘤细胞中累积了大量突变型蛋白，因之可以通过免疫组化法检测出来[7]。
, 百拇医药
突变型p53在肺癌中发生频率很高，YosukeK[4]、HorioY[8]等认为，52%的肺癌能观察到p53结构的畸形，而本组矿工肺癌p53突变率达60.98%，高于此比率，非矿工肺癌p53突变则为36%，又低于此比率，但总的均符合肺癌中突变p53高表达的规律。
云锡矿粉致肺癌已有报道[1，9]，化学分析指出，矿粉中除锡和矽外，还含有10多种金属，包括微量的放射性元素和较多的砷、铅、镍、铬及其他金属化合物[6]。本组矿工肺癌p53呈现高表达，且与非矿工肺癌间存在显著差异，说明云锡矿粉较特殊的致癌因素导致肺癌高发的机理与p53突变有明显的关系。
从癌变的组织学类型来看，云锡矿工肺癌以鳞癌为多见[9]，说明不同致癌因素所引起的肺癌组织学类型存在差异，而本组矿工肺鳞癌p53阳性明显高于非矿工肺鳞癌，因之可以认为云锡矿粉可导致较多p53突变是矿工肺鳞癌多见的可能原因之一。
, 百拇医药
本组检测还发现在肺癌周围增生的支气管粘膜上皮细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞出现有p53阳性，提示增生上皮即已有p53突变存在，值得引起注意并深入研究。
*云南省自然科学基金资助课题，编号94C049M
参考文献
[1]黄润(执笔).云锡矿工肺癌实验病因学系列研究.中华结核和呼吸杂志，1995，18(1)：34
[2]杨树勤.中国医学百科全书：医学统计学，第二版.上海：科技出版社，1985：89
[3]Levine A J. The p53 tumor-suppressor gene [editorial; comment]. N Engl J Med, 1992, 326:1350
, http://www.100md.com [4]Yosuke K, Yoshinori M, Masakiko S, et al. Aberration of the p53 Tumor Suppressor Gene in Human Non Small Cell Carcinomas of the lung. Cancer Res, 1992, 52:4799
[5]Lane DP. p53, guardian of the genome. Nature, 1992, 358(2):15
[6]王蘅文.实验肿癌学基础.第一版.北京：人民卫生出版社，1992：50
[7]Purdie C A, O'Grady J, Piris J, et al. p53 expresion in colorectal tumors. Am J Pathol, 1991, 138(4):807
[8]Horio Y, Suzuki H, Ueda R, et al. Predominantly tumor-limited expression of a mutant allele in a Japanese family carrying a germline p53 mutation. Oncogene, 1994, 9:1231
[9]赵桂芳，孙来华，姬学敏，等.大白鼠气管灌注云锡矿尘和吸入氡及其子体诱发肺癌的对比研究.肿瘤，1989，9(6)：273
(收稿：1997-10-08修回：1998-03-10), 百拇医药
单位：100037 北京，解放军第三四医院全军烧伤研究所
关键词：烧伤；休克；内皮素；一氧化氮
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【摘要】目的：为深入探讨云锡矿工肺癌高发的发病机理，找寻早期诊断的方法和理论依据。方法：应用免疫组化方法对云锡矿工肺癌41例(M组)、非云锡地区非矿工人群肺癌25例(NM组)和正常肺组织15例(C组)进行p53检测比较研究。数据用四格表确切概率法进行组间显著性测验。结果：发现p53阳性率M组为60.98%，NM组为36%，C组为0，三组间差异有高度显著性(P<0.01)，M组与NM组亦有显著差异(P<0.05)，且M组与NM组间鳞癌的p53阳性存在显著差异(0.05
中图号：R734.2
A Study of the p53 Tumor Suppressor Gene in Yunnan
Tin Miner's Lung Carcinoma
Jin Kewei1 Gao Qian1 Sun Laihua2， et al
1 Department of Pathology, Kunming Medical College, Kunming 650031
2 Labour Health Institute of Yunnan Tin Industry company, Gejiu 661400
, 百拇医药
【Abstract】 Purpose: To search the pathogenesis of lung carcinoma in Yunnan Tin Mine and looking for early diagnosis method. Methods: The p53 protein were studied in 41 cases of Yunnan Tin miner's lung carcinoma (Group M), 25 cases of lung carcinoma in other regions (Group NM), and 15 cases of normal lung tissue (Group C), with immunohistochemistry method. Results: The result shows that positive rate of p53 was 60.98% in Group M, 36.00% in Group NM and 0.00% in Group C, respectively. There is a significant difference between Group M and Group NM (P<0.05). In addition, a significant difference is also identified in comparison of squamous cell carcinoma between these two groups. ( 0.05< P< 0.10). Conclusion: It suggests that p53 mutation is common in lung carcinoma, and the special carcinogenesis factors of Yuman Tin mine's dust may results in p53 mutation more frequently. It might be an explanation why the squamous cell carcinoma make up the majority of Yunnan Tin miner's lung carcinoma. An interesting finding is that positive of p53 in hyperplastic epithelial cells of bronchial mucosas and alveolar type Ⅱ around carcinoma of the lung. Whether it is an indicator of the early lung carcinoma? It is worth to study farther.
, http://www.100md.com
Key words: Lung carcinoma, Yunnan Tin miner, p53, Immunohistochemistry.
云南个旧市云锡矿工肺癌高发引起了国内外关注，经多方研究，其发病与矿粉中氡及其子体和砷、铅、铁、铝等多种元素的共同作用密切相关[1]。为深入探讨其发病机理，我们对矿工和非矿工肺癌p53基因的表达进行了检测并作比较分析。
1 材料和方法
1.1材料来源
收集云锡公司矿工肺癌标本41例，称矿工肺癌组(M组)，全为男性，年龄45～63岁，平均52.2岁，坑下工龄7～39年，平均24年。其中鳞癌27例，腺癌6例，鳞腺复合癌3例，小细胞未分化癌5例；非云锡地区非矿工人群肺癌25例，称非矿工肺癌组(NM组)，全为男性，年龄段与M组相同。其中鳞癌10例，腺癌14例，鳞腺复合癌1例；并取非肺部疾患为主要死因的尸解肺组织15例作对照组(C组)，全为男性，年龄段与M组相同。以上材料经福尔马林固定，石蜡包埋，常规制片备用，H.E染色进行病理组织学观察。
, 百拇医药
1.2方法
1.2.1免疫组化方法检测：p53单抗为美国SantaCruz公司生产，免疫组化试剂盒为美国ZYMED公司生产。具体操作步骤：常规脱蜡、水化；3%H2O2孵育20min，37℃；PBS洗5min，3次；枸橼酸盐缓冲液中加热10min，92℃～98℃；缓冲液与切片一齐置入室温下冷却10min；取出切片，PBS洗5min，3次；以下按LSAB法进行(即SP法)。
1.2.2结果判断：p53阳性为棕色，位于细胞核内，根据颜色深浅，分为弱阳性(+)、阳性(++)和强阳性(+++)(图1)，以PBS代替一抗为阴性对照，不显色。本文每例按上法重复3次，均获相同结果。
1.3统计方法
检测数据用四格表确切概率法进行组间显著性测验。
, 百拇医药
2 结果
2.1p53免疫组化结果
经统计学处理，χ2=17.29，P<0.01，三组间差异有高度显著性。M组与NM组比较，χ2=3.88，P<0.05，存在显著差异。而M组与C组间比较，χ2=16.52，P<0.0001；NM组与C组比较，χ2=6.97，P<0.01，均存在高度显著差异，详见表1。
表1 两组肺癌组织和对照组p53免疫组化检测结果
组别
例数
p53表达
阳性率(%)
, http://www.100md.com
P值
+
++
+++
矿工(M组)
41
16
2
7
25(60.98)
<0.05▲
非矿工(NM组)
25
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6
2
1
9(36.0)
<0.0001*
对照(C组)
15
0
0
0
0(0.0)
<0.01▲*
▲：M与NM比较；*：M与C比较；▲*：NM与C比较
, http://www.100md.com
癌周肺组织内p53免疫组化检测发现矿工和非矿工组可见增生支气管粘膜上皮和Ⅱ型肺泡上皮呈现阳性(图2，3)。
2.2不同组织学类型肺癌p53表达
不同组织学类型肺癌p53免疫组化检测结果见表2。可见矿工肺鳞癌的p53表达明显高于非矿工肺鳞癌的p53表达。
表2 肺癌不同组织学类型p53检测结果
组织学类型*
矿工组
非矿工组
例数
阳性
%
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例数
阳性
%
鳞癌
27
15
55.6
10
2
20
腺癌
6
5
83.33
, http://www.100md.com
14
7
50
*组织学分类除鳞癌、腺癌外，余因例数太少，故未列入表内。
由于矿工肺癌标本收集不易，本组所获病例有限，故此表组间阳性率比较时取α=0.10作为显著性水准，即P≤0.10认为差异有显著性[2]。表2经统计学处理，M组与NM组间鳞癌p53阳性0.05
3 讨论
已经认识到p53是重要的抑癌基因，与多种癌的发生有关，基因突变是常见的现象[3，4]，突变或与病毒蛋白结合的p53失活不能履行功能而导致恶性克隆的迅速选择[5]。野生型p53基因产物p53蛋白代谢不稳定，半衰期短，在正常细胞中用免疫组化法几乎不能检出p53蛋白。而突变型p53蛋白稳定性高、半衰期长，在肿瘤细胞中累积了大量突变型蛋白，因之可以通过免疫组化法检测出来[7]。
, 百拇医药
突变型p53在肺癌中发生频率很高，YosukeK[4]、HorioY[8]等认为，52%的肺癌能观察到p53结构的畸形，而本组矿工肺癌p53突变率达60.98%，高于此比率，非矿工肺癌p53突变则为36%，又低于此比率，但总的均符合肺癌中突变p53高表达的规律。
云锡矿粉致肺癌已有报道[1，9]，化学分析指出，矿粉中除锡和矽外，还含有10多种金属，包括微量的放射性元素和较多的砷、铅、镍、铬及其他金属化合物[6]。本组矿工肺癌p53呈现高表达，且与非矿工肺癌间存在显著差异，说明云锡矿粉较特殊的致癌因素导致肺癌高发的机理与p53突变有明显的关系。
从癌变的组织学类型来看，云锡矿工肺癌以鳞癌为多见[9]，说明不同致癌因素所引起的肺癌组织学类型存在差异，而本组矿工肺鳞癌p53阳性明显高于非矿工肺鳞癌，因之可以认为云锡矿粉可导致较多p53突变是矿工肺鳞癌多见的可能原因之一。
, 百拇医药
本组检测还发现在肺癌周围增生的支气管粘膜上皮细胞和Ⅱ型肺泡上皮细胞出现有p53阳性，提示增生上皮即已有p53突变存在，值得引起注意并深入研究。
*云南省自然科学基金资助课题，编号94C049M
参考文献
[1]黄润(执笔).云锡矿工肺癌实验病因学系列研究.中华结核和呼吸杂志，1995，18(1)：34
[2]杨树勤.中国医学百科全书：医学统计学，第二版.上海：科技出版社，1985：89
[3]Levine A J. The p53 tumor-suppressor gene [editorial; comment]. N Engl J Med, 1992, 326:1350
, http://www.100md.com [4]Yosuke K, Yoshinori M, Masakiko S, et al. Aberration of the p53 Tumor Suppressor Gene in Human Non Small Cell Carcinomas of the lung. Cancer Res, 1992, 52:4799
[5]Lane DP. p53, guardian of the genome. Nature, 1992, 358(2):15
[6]王蘅文.实验肿癌学基础.第一版.北京：人民卫生出版社，1992：50
[7]Purdie C A, O'Grady J, Piris J, et al. p53 expresion in colorectal tumors. Am J Pathol, 1991, 138(4):807
[8]Horio Y, Suzuki H, Ueda R, et al. Predominantly tumor-limited expression of a mutant allele in a Japanese family carrying a germline p53 mutation. Oncogene, 1994, 9:1231
[9]赵桂芳，孙来华，姬学敏，等.大白鼠气管灌注云锡矿尘和吸入氡及其子体诱发肺癌的对比研究.肿瘤，1989，9(6)：273
(收稿：1997-10-08修回：1998-03-10), 百拇医药